[求救] inclusion body回融不出我的目標蛋白

看板Biotech作者coco85101 (我不是李紋)時間12年前 (2013/07/22 01:49)推噓1(1推 0噓 6→)

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各位好我已經卡在蛋白純化很久了希望大家可以救救我我目前利用pET29-target protein(有His) transform到E.coli BL21(DE3)去進行表現 IPTG induction 4hrs後開始以 1X Binding buffer 回融菌破菌 (sonicator 0.8/0.8 Amp37% 1hr) *500mM NaCl , 20mM sodium phosphate 破菌後離心分為soluble form 和 inclusion body inclusion body再以 1X 6M urea binding buffer回融O/N *500mM NaCl , 20mM sodium phosphate , 6M urea 隔天離心後發現我的目標蛋白沒辦法回融在含6M urea的binding buffer內學長姐以前也從來沒遇過這種問題我的目標蛋白不是膜上的蛋白,沒有signal peptide , 有兩個ZinC finger 也確定過已經大量表現了且破菌時間蠻長的，應該菌都打破了阿請各位救救我啊.... 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.164.26.209

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