Re: [求救] 請問螢光免疫染色時的背景值太高可能原因

看板Biotech作者 (我不是盒子)時間11年前 (2013/04/09 14:13), 編輯推噓1(104)
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※ 引述《taiwanlin (Emma Lin)》之銘言: 請問大家一個問題,螢光免疫染色的背景值太高,除了是抗體稀釋倍數不當 以及blocking buffe的原因外,還會有什麼可能的原因嗎?? 請大家提供我一些經驗參考一下,謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.100.87.197

03/11 22:01,
自體螢光也會干擾
03/11 22:01

03/12 00:25,
wash不夠徹底也會...
03/12 00:25

03/15 12:48,
抗體專一性不夠(不論一抗二抗)
03/15 12:48
最近染螢光免疫染色也碰到相同問題(我用石蠟切片) 除了背景太高之外,切片邊緣部份顏色更深 有時連DAPI都染不上.... 想請問大家wash都是用PBST浸泡還是要放shaker呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 1.34.125.25 ※ 編輯: slimebox 來自: 1.34.125.25 (04/09 14:13) ※ 編輯: slimebox 來自: 1.34.125.25 (04/09 14:13)

04/09 14:36, , 1F
浸泡就夠了
04/09 14:36, 1F

04/09 18:17, , 2F
可以考慮使用Dako的抗體稀釋液..效果很好!
04/09 18:17, 2F

04/09 18:18, , 3F
Wash的部份就一般的PBS..外面也是有在面washer buffer的!
04/09 18:18, 3F

04/09 18:19, , 4F
石臘切片染色是種學問..可以問廠商解決問題 也比較快!
04/09 18:19, 4F

04/09 18:19, , 5F
如果自己想太久 也是會瘋的!
04/09 18:19, 5F
非常感謝大家的回答!!!!! ※ 編輯: slimebox 來自: 1.34.125.25 (04/09 22:07)
文章代碼(AID): #1HOx5vEC (Biotech)
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