[求救] MTT assay

看板Biotech作者 (豪洨哥)時間11年前 (2013/03/14 12:26), 編輯推噓3(3012)
留言15則, 7人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
不好意思,上來請教一下 目前我做的實驗是以光動力治療產生自由基來殺死癌細胞(hela cell) seed在96 well裡,每格5000個,養兩天後加藥 實驗組別有 1.medium裡加入亞甲基藍,放回培養箱2hr後拿出來打雷射4分鐘(光動力治療組) 2.一樣是加入亞甲基藍,但是不打雷射(測單純藥物暗毒性組) 3.什麼都不做(control group) 目前我是在下藥後的隔一天才拿出來做MTT assay 但做了好幾次結果都跳動很大不如預期 我在想隔一天才做MTT會不會隔太久, 可能光動力治療後死掉的細胞也沒那麼多,隔天就又長滿了 但又怕太早做的話,細胞還沒死透,這樣測出來會不準 據我所知,光動力治療會induce cell apoptosis 而MTT是靠測量粒線體活性來反映細胞活性 請問若細胞已經開始aptosis的話,粒線體會馬上失去活性嗎? 還是要等到later stage的時候才會呢? 查了好幾篇相關paper關於這方面的細節都沒有詳述 學長姐們做的實驗方向也跟我不太一樣,愛莫能助 所以只好上來求救了 謝謝幫忙~"~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.182.185

03/14 12:59, , 1F
沒先做雷射強度梯度測試 還有positive control?
03/14 12:59, 1F

03/14 13:16, , 2F
樓上中肯 有相關的reference嗎?
03/14 13:16, 2F

03/14 13:37, , 3F
ap"op"tosis?
03/14 13:37, 3F

03/14 14:13, , 4F
你可以查一下一般radiation之後,大概多久才看到cell death
03/14 14:13, 4F

03/14 14:16, , 5F
再去回答隔一天就加MTT會不會太短,再者5000cell放兩天才處
03/14 14:16, 5F

03/14 14:17, , 6F
理,應該可以在處理當下看到細胞在96well就差不多要擠滿了
03/14 14:17, 6F

03/14 14:21, , 7F
這種滿度下control組還要多放一天才做MTT,顯然不太好
03/14 14:21, 7F

03/14 14:48, , 8F
blence正解,hela長得快的跟細菌一樣,今天seeding明天就要
03/14 14:48, 8F

03/14 14:50, , 9F
做了,另外,96 well最外圍的well不要用,medium體積會變動
03/14 14:50, 9F

03/14 18:25, , 10F
有先算hela的double in time嗎? 測MTS前不是都要先
03/14 18:25, 10F

03/14 18:25, , 11F
測細胞的生長曲線嗎?看他多久二分裂,加藥後光動力治
03/14 18:25, 11F

03/14 18:25, , 12F
療可能三小時六小時九小時測一次這樣!
03/14 18:25, 12F

03/14 18:25, , 13F
一點小小的意見不知這對不對!請見諒
03/14 18:25, 13F

03/15 22:50, , 14F
感謝各位的回答 我先把加藥時間提前看看 seeding後放兩天
03/15 22:50, 14F

03/15 22:51, , 15F
真的太長了
03/15 22:51, 15F
※ 編輯: sss79818 來自: 112.104.153.17 (03/15 22:51)
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