[求救] apoptosis 測法

看板Biotech作者 (小均均)時間13年前 (2013/01/09 11:04), 編輯推噓3(3推 0噓 17→)
留言20則, 4人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
各位版友好 目前我在測神經細胞的apoptosis 我用了 IMR32, N2A, dPC12 三種細胞去測 方法為annexin V /PI 去測 都只測到PI annexin V 則毫無反應 請別間實驗室去測 確定annexin V是沒問題的 我是和有經驗但以前用不同細胞測的學姊一起測 所以操作上應該沒有問題 請問為什麼會有這樣的情況呢? 我現在想改用 H 33342 /PI 去測 (flow) 或單純用 H 33342 去測 (microscope) 想問後者要如何進行數量分析? 是一個一個數然後看有哪些產生apoptosis 還是直接算螢光強度就好了呢? (我看paper都只說用microscope去測量) 謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.79.11
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01/09 11:23, , 1F
時間點有往前試過嗎? late apoptosis也會變成annexin V-
01/09 11:23, 1F
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01/09 11:24, , 2F
第二點之前經驗是算apoptosis百分比 較好 強度可能不太準
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因為ANNEXIN v完全沒有，連一點反應也沒有...
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同時做個positive control看看? 也可能是染劑問題
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有確定Annexin V後面接的flurophore可被偵測到嗎?
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有請別實驗室的同學做過不同實驗，annexin V 沒問題
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如果都不是的話 可能就要換方法看看了
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01/09 12:04, , 8F
還有想到一個 Annexin V染完後要馬上測 不然會消失
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不知是否這原因
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使用Cycloheximide做為positive control
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01/09 12:07, , 11F
全程避光，因為有加pi所以無法馬上測
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非常感謝您喔~
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推
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ORZ 那只好建議先換方法看是否真是apoptosis了 祝順利
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抱歉這三種細胞都沒做過~無法幫上忙@@
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推
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是指positive ctrl也都只有PI+?
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是的!!!
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推
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確定這個postive ctrl適用這些細胞嗎 濃度是否正確
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01/09 22:42, , 18F
該不會都necrosis了
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01/10 11:38, , 19F
感覺是染劑問題或沒染上 印象中late apoptosis比較會
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01/10 11:38, , 20F
是annexin V+ PI+
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