Re: [求救] Rat cortical neuron 培養
※ 引述《kattyhouse (kat)》之銘言：
: 因為實驗室剛開始做cortical neuron的primary culture...
: 所以想跟版上前輩們請教
: 是取出生24hr內SD Rat 的cortex 使成為 single cell
: 再利用DMEM/F12+10% FBS 培養24hr後
: 才換成DMEM/F12+B27+Ara-C (10uM)
^^^^^
你加了Ara-c喔
我沒有做過新生老鼠 所以不知道culture以後的Glia含量
不過E17的胚胎在加了Ara-c 以後因為Glia(釋放出的養分)不足
容易導致細胞死光光喔~
一般的決辦法是使用Glia condition medium
或是偷雞的把養了Glia的玻片放進同一個well裡面
我記得某一篇paper在medium裡面不知道加了什麼 是全沒有使用Glia condition medium
不過E17,18的neuron的確是又純又容易生長沒錯阿~(菸)
看了一下前面的推文
的確在把細胞打散的時候細胞很容易受傷
如果想要culture純度較高的neuron
我們也是 DMEM + 10% FBS 一天以後換成 NB + B27 + Glx
NB聽說除了可以促進神經細胞的生長以外 也比較不利膠細胞的生長
希望你實驗一切順利啦!
: 並且會另外添加鉀離子(K+)使Medium中的鉀是20-30mM
: culture在PDL(poly-D-lysine) coating 的coverslip上 (cell density是2X10^5)
: 但是細胞會在1週內死亡
: (4-5天會有morphology的change會有細胞空洞並且有凋亡的現象)
: 但一般都可以培養2week以上...
: 請問有前輩知道是哪裡有做錯的地方嗎??
: 謝謝
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◆ From: 140.109.103.228
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推
11/22 01:08, , 1F
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