Re: [方法] 跑SDS gel % 數選擇
※ 引述《spirithorse (咩)》之銘言：
: 我的目標蛋白大約在10KDa左右
: 所以使用15% SDS gel
: 但是做WB時只需要看actin (42KDa)跟目標蛋白(10KDa)
: 而15%的gel只有大概在30KDa以下的marker會分很開
: 於是我有問題想請問...
: 因為也不是要區分"很多"10KDa左右的蛋白
: 那是否可以跑12%或10%的gel呢?? (8%我看marker 15-10KDa分不開)
: 總覺得不知道哪裡怪怪的~
手工配10%/15%的下膠
配15%的膠其中H2O的部分裡面含甘油20%
舉例
30 % acrylamide stock 16 ml
H2O 8 ml(with 1.6ml甘油 )
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
10% SDS 8 ml
10 % APS 160 μl
TEMED 15μl
假設你的下膠體積是10ml，10%和15%的比例可以是1:1也就是各5ml
先把15%的膠注入5ml後，再把10%的膠用非常緩慢低速度沿著玻璃壁注入
你可以看到膠會有分層，或者tip尖端垂直抵著玻璃片沿著玻璃片由左向右移動
同時也是緩慢滴注入10%的膠，重點在於注入膠的速度避免混合即可
注完後你會看到因為膠對光的折射率不同，出現一條性感帶
多練幾次就可以抓到訣竅了
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