Re: [求救] western抗體reuse

看板Biotech作者 (六百)時間14年前 (2011/12/26 04:04), 編輯推噓8(808)
留言16則, 10人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
※ 引述《suhow (單身一輩子..)》之銘言: : 各位作western的初級抗體都會reuse嗎? : 通常都是1:1000浸泡在5% milk/PBSt吧 要 reuse 通常不會放牛奶 或用牛奶的話最多在幾天內 reuse 要長期 reuse 用 BSA 或/與血清較好 可加一點 NaN3 當然,後續的 wash 要注意一點 至於說可以 reuse 多少次/保存多久 實在是 case by case 極端一點的是聽說過有人整篇論文只用同一管 working solution 用到畢業 : 置於-20度冰箱,通常都reuse幾次呢? 別這樣啊老大 O_o 蛋白質溶液不宜反覆冷凍解凍啊 : ========================================= : 最近常常跑不出來,連band的痕跡都沒有, : 底片空空如也,不知道是哪裡出問題了..... : 之前transfer一片都壓得出來,可是只要同時transfer兩片就壓不出來 : 是不是多加一片,transfer的電壓或是電流就要增加? 要先檢查是 transfer 有問題?還是染抗體有問題? 先把你的 membrane 拿去染染看 確認有沒有 protein 不過話說我現在忽然忘記染完還可以拿去作 western 的染色法叫啥了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 97.92.4.12

12/26 04:38, , 1F
Ponceau S
12/26 04:38, 1F

12/26 08:56, , 2F
其實還是case by case,有加牛奶且放-20也有可reuse很久的
12/26 08:56, 2F

12/26 09:22, , 3F
我也有用過加1.5%牛奶且放-20℃ 目前用到第三次吧XD
12/26 09:22, 3F

12/26 12:07, , 4F
我 GAPDH 一抗用了兩年 二抗用一年 好的抗體真的都可放挺久
12/26 12:07, 4F

12/26 15:26, , 5F
Actin那種強得要命的真的可以用到天荒地老,弱的(或目標蛋白
12/26 15:26, 5F

12/26 15:27, , 6F
很少),全新的跟用過一次的壓出來清晰度就有差
12/26 15:27, 6F

12/26 18:46, , 7F
謝謝各位喔
12/26 18:46, 7F

12/26 20:05, , 8F
有推薦的GAPDH抗體嗎 強到爆的那種 像sigma的actin超好用
12/26 20:05, 8F

12/26 20:26, , 9F
壓500x看看,雖然廠商都寫建議1000x~10000x
12/26 20:26, 9F

12/26 20:29, , 10F
實際上可能要用到500x甚至200x。
12/26 20:29, 10F

12/26 20:32, , 11F
很難有便宜又好用的抗體 > <
12/26 20:32, 11F

12/26 21:07, , 12F
牛奶沒加NaN3四度西大概放一天就臭掉了 我也不建議牛奶
12/26 21:07, 12F

12/28 12:52, , 13F
millipore GAPDH 還不錯用!
12/28 12:52, 13F

01/03 16:28, , 14F
看抗體 同一個抗體不同批買壓出來的band強度也有差
01/03 16:28, 14F

01/03 16:29, , 15F
(我們是這樣啦 平平都是HCV NS5B 這批買的壓一分鐘老師
01/03 16:29, 15F

01/03 16:29, , 16F
說太深..之前壓兩分鐘剛好= ="
01/03 16:29, 16F
文章代碼(AID): #1Ezu7V9S (Biotech)
討論串 (同標題文章)
文章代碼(AID): #1Ezu7V9S (Biotech)