Re: [討論] PCR試劑
※ 引述《kobeiloveyou (我超強暴)》之銘言：
: 大家好
: 請問PCR試劑
: sterile distilled water、dNTPs、PCR buffer、forward primer、reverse primer
: 可以先加好 儲存在-20度嗎? 隔天再加 taq polymerase、template
: 還有
: 每次在加試劑時 都很怕汙染到 所以每加完一個PCR tube 就會換一個tip
: 再去吸相同試劑 加下一個 PCR tube
: 請問試劑會不會很容易汙染阿?
: 謝謝大家
你列出的藥劑含taq，都可以配成mix存在-20
效期都可以到一年以上
但是要加抗凍劑(e.g. > 5% glycerol)或是PCR additives(e.g. trehalose)，
增加taq和dNTP的安定性
另外你說的換TIP問題
有兩個考量的地方
第一個是如果你的PCR TUBE裡面已經有TEMPLATE了，
那最後是每加一管就換一個TIP，以防止交叉污染發生
第二個比較重要的點是
如果你加完一管就換一個TIP
很可能每管加的PREMIX量會有些微誤差(因為TIP會沾黏PREMIX)
在某些很敏感的實驗中(e.g. Q-PCR) 會影到到結果判讀
所以最好的作法是先將tip在premix中吸排幾下，讓tip先沾黏一些premix再開始分裝
比較不會有pipetting error
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.231.91.98
推
10/22 00:54, , 1F
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