[求救] 人類紅血球的螢光染色

看板Biotech作者 (kkk)時間12年前 (2011/08/29 15:10), 編輯推噓8(8018)
留言26則, 4人參與, 最新討論串1/1
想要請教各位生醫底子比在下強n倍高手,關於紅血球的螢光染色用nile red是否恰當 小弟的染色步驟是先取3ul的血球溶到等滲透壓的蔗糖水溶液內加以輕微晃動分散, 接著將nile red染劑2ul加入,一樣輕微晃動5分鐘使其均勻混和,最後以離心置換蔗糖 水溶液的方式將多餘的染劑去除掉(清洗兩次),再加入調整過導電度的等滲透壓buffer 可是問題來了,經過離心清洗過後紅血球變得相當難分散,在顯微鏡底下確認過都聚集 成一團一團的狀況,想請教的問題是有可能是nile red的影響導致抗凝血劑失效嗎,又 或是說抗凝血劑本身有問題? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.242.179.28

08/29 18:02, , 1F
清洗過程是不是會把抗凝血劑沖淡?!蔗糖水是否要抗凝血劑?
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08/29 18:45, , 2F
多謝l大的提醒,只是抗凝血劑有在單賣嗎?
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08/29 18:46, , 3F
當初是買整組的抗凝血玻璃管,不清楚是否有單賣
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08/29 22:37, , 4F
Buffer配方提供一下~
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是用 EDTA tube (紫頭管)嗎?
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PBS 洗三次, EDTA 洗掉, 凝血因子也洗掉了
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還會 agglutination 大概是沒洗乾淨
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還有, 高濃度的 sucrose 會抑制 agglutination
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FYI, 洗乾淨的 RBC, 室溫一個禮拜都不會
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agglutination. (沒乾掉的話)
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weisheng0518大,是用EDTA tube (紫頭管)沒錯
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buffer的話是sucrose300mM+PBS去調整導電度
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如果PBS洗完還是一堆 agglutination,
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我猜是採血完沒跟 EDTA mix 均勻.
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所以weisheng0518大的意思是抗凝血玻璃管有問題嗎?
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300 mM sucrose 很高. 有non-specific inhibition
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是用過期的紫頭管嗎?? @@a
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學長是有覺得這次買得管子裡抗凝血劑有點少,而且還有凝
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結在管壁的現象
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尚未染色前有用顯微鏡確認過,分散的的確不如以往
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那再重抽血, 確定馬上抽完馬上mix均勻
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染色之後更糟
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ok,謝謝weisheng0518大的回答,只好重抽血了
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Good luck :)
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BTW, 覺得 EDTA 比較少, 那就不要抽一整管血
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2/3 管滿或更少
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文章代碼(AID): #1EMpjNDb (Biotech)