Re: [求救] Transfer加0.1%SDS後marker不見了?!!
※ 引述《mikis1107 (mikis1107)》之銘言：
: 如題~~
: 因為想要把大分子的轉過去
: 所以採用版上跟Abcam建議的方式
: 把methol移除+0.1% SDS進去buffer內
: 但是轉了80分鐘後發現
: 小分子的marker都不見了@@
: 剩下大分子的marker也變淡很多很多@@
: 請問為什麼會這樣??
: 我確定我沒有擺反跟電極插錯!!XD
: 感謝各位^^
加了 SDS 是為了要增加 protein solubility。
大分子的 protein 在失去 SDS 的時候，溶解度可能會降低，
導致蛋白質無法從 acrylamide gel 中出來。
但是，因為 SDS 會增加 protein solubility，
所以如果你的蛋白質溶解度已經不錯了，又加了 SDS，
反而會無法與 membrane 黏附在一起。
另外，一般加 SDS 加到 0.05% 就已經很多了，
可能也要慢慢試最適合你的蛋白質的濃度。
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◆ From: 140.112.79.42
※ 編輯: Rarelay 來自: 140.112.79.42 (07/08 19:29)
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