Re: [求救] EGF stimulation
※ 引述《resistor (resistor)》之銘言：
: 請問有人用EGF刺激H1299或其他肺癌細胞嗎?
: 實驗中要用EGF刺激下游的AKT.ERK表現
: 想要間接證明細胞膜上的EGFR受藥物影響
: 但control組本身AKT.ERK的表現量很高
: 導致加入EGF後看不出差異
: 參考文獻後發現
: 每篇control的EGFR.AKT.ERK的表現量差異很大
: 有的幾乎沒表現
: 有的刺激前後沒太大差異 表現量都蠻高的
你用 H1299 的原因是什麼??
你有看過他 EGFR 的表現量嗎?
他帶的是 wt EGFR
我幾乎可以確定這個 cell line 的 survival 根本不 depend on EGFR signaling
你有試過加 egfr inhibitor 之後看 Akt 嗎?
他的 Akt signaling 很有可能不是主要靠 EGFR 去 activate
: paper對加EGF的部份並沒有很詳細的描述
: 所以想請教大家
: 加入EGF前需要把medium換成serum free 還是直接加入就好
: 細胞數對EGF刺激的結果是否有影響
: 因為要處理藥物加上要收western用的sample
: 所以種的細胞數很多 3x10^6/10 cm dish
: 就EGFR.pEGFR的部份
: 抽膜蛋白結果是否會更準確? paper上似乎都沒有提到這點
妳要收細胞的時候
吸乾medium -> pbs wash 吸乾淨一點 -> 直接加 4M urea buffer -> sonication
所有東西都會溶在 urea 裡面
: 請有經驗的高手提供我一些意見了
: 謝謝
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◆ From: 24.46.118.244
推
05/03 23:20, , 1F
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