Re: [求救] RNA PCR

看板Biotech作者 (找愛 小護士)時間14年前 (2011/04/25 19:15), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
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※ 引述《vm212 (找愛 小護士)》之銘言： : 各位前輩們 : 因為最近剛開始做有關RNA的實驗， : 我抽完RNA轉Cdna後接著做PCR : 但一直沒有PCR產物產生 : 我想請問 : 是否為我的PRIMER有問題 : 當初設計PCR PRIMER的時候 : 是利用ncbi中目標基因的 mRAN進行設計 : 還是需要利用目標基因的dna進行設計/// : 謝謝大家的幫忙了!!! 各位前輩很抱歉我沒交代清楚~~ 我的實驗目的是利用overlap PCR做gene mutation 利用kit抽取rna後，作RT-PCR。 因為卡住好久了 又沒人可以問 所以來這邊叨擾大家... 謝謝大家!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.160.150.114
推
04/25 22:10, , 1F
每個步驟都做個control來check才能知道問題在哪啊~
04/25 22:10, 1F
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04/25 22:11, , 2F
抽的RNA quality如何?!RT-PCR後,拿個actin一起PCR~
04/25 22:11, 2F
推
04/25 22:13, , 3F
不然你沒作check~光這樣問要怎樣知道哪出問題了!?擲茭嘛?
04/25 22:13, 3F
推
04/26 01:27, , 4F
甚至reagent,kit的control能做就做 不要鐵齒
04/26 01:27, 4F
→
04/26 01:28, , 5F
cell type是不是有表現你要的gene 很多都要先弄清楚
04/26 01:28, 5F
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04/26 01:30, , 6F
我有碰過一個gene在某cell表現量很低甚至說沒有
04/26 01:30, 6F
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04/27 00:15, , 7F
如果有full-length的plasmid拿來p或許會輕鬆許多！
04/27 00:15, 7F
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04/27 00:15, , 8F
至少不會有p到其他東西的可能 我也卡很久 還有三個突變等著
04/27 00:15, 8F
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04/29 21:03, , 9F
我pcr終於p出來了，謝謝大家的幫忙!
04/29 21:03, 9F
→
05/04 11:23, , 10F
所以原PO是哪裡出問題? 抱歉我沒追蹤文章
05/04 11:23, 10F
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