Re: [求救] HeLa cell 在 transfection時 一直有汙 …
※ 引述《brume1026 (蒼之濤)》之銘言：
: 不好意思
: 想請教養HeLa cell的大大
: 剛到新實驗室 接手前人的細胞做
: 事情是這樣子的
: 我要transfect plasmid進去HeLa cell跟HEK293T 這二株細胞
: (我們實驗室用的是Lipofectamine 2000)
: 在同樣的條件下
: 早上大約10點進行實驗
: 隔天要收細胞做實驗時 卻發現HeLa cell有汙染的情形
: (有白白 像細沙的東西)
心有戚戚焉，因為我前陣子也發生過類似的汙染，
不過原因倒是一下就找出來了。ddw出問題。
: HEK293T 卻沒有被汙染
: (能排除所有reagents的問題?!)
如果兩邊用的reagents都完全一樣的話那大概就不是這邊的問題。
: 之後我從新解凍之前助理所凍的HeLa cell
: 一開始我就用DMEM+10%FBS 沒有加抗生素去培養 (4/8)
: 4/11回來繼代細胞 看它也都好好的 沒有汙染
: (在我用trypsin去切的時候 5分鐘後 細胞還是切不太下來!! 之後就給它再切2分鐘)
你有試過用trypsin之前先用PBS wash個兩次嗎?
我以前趴HeLa cell的時候洗兩次，通常trypsin下去不用放到37度，30秒都切得下來。
: 所以我就順便seeding cell 隔天做transfection的實驗
: 早上看細胞 也是沒汙染的情形
: 今天早上10點左右做完
: 下午離開實驗時前 卻發現它汙染了= =
: (汙染速度好快! 也是白白濁濁的)
從你的描述我猜是細胞本身就有問題了，可能凍的人就沒凍好。
: 跟上次同樣的reagents
: 想請教的是為什麼會發生這種現象?!
: 會是細胞本身有問題嗎?! 還是有其他可能的原因呢?!
: 我想的解決方法以及可能的原因是:
: 1.就是在種細胞 分別加入 OPTI-MEM、Lipofeatamine、plasmid以及 DMEM only做檢測
用一個6 well把你用的reagent分別加進去(DDW也可以當一組測試)
: 2.利用 microplasma kit去檢測
3.跟別的實驗室借他們的HeLa來用用看。
: 還有其他解決方法嗎?!
: 請大大們賜教囉 感恩^^
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推
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