[求救] qPCR無產物

看板Biotech作者 (梅子)時間15年前 (2011/03/28 23:02), 編輯推噓1(1推 0噓 7→)
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我的實驗流程如下 取小鼠全血→分別利用kit及trizol方法抽取RNA→用SuperScript® III Reverse Transcriptase進行RT-PCR→將得到的cDNA進行qPCR 除了在抽RNA時用兩種方式抽之外 其他皆一樣步驟 遇到的問題是 使用trizol方法抽取出的RNA 最後qPCR可得到產物 而 用kit方法抽取出的RNA 最後qPCR 完全沒有產物的存在.. 所抽出的RNA皆有跑膠確認及測260/280 確定是可以的才往下作 卻最後一步出錯 想問問版上的高手 這樣有可能在哪邊出錯? 謝謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 125.224.0.72
推
03/29 00:08, , 1F
用什麼primer?
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03/29 09:42, , 2F
除了抽RNA用兩種方式抽之外,其他都一樣,那就是RNA的問題
03/29 09:42, 2F
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03/29 20:46, , 3F
primer就是目標基因的primer..
03/29 20:46, 3F
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03/29 20:47, , 4F
RNA哪邊的問題 都有抽出來..
03/29 20:47, 4F
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03/30 00:22, , 5F
會不會你設計的primer是在intron上~換poly-T的primer試試
03/30 00:22, 5F
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03/30 20:53, , 6F
Primer確定過沒問題
03/30 20:53, 6F
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04/01 19:56, , 7F
會不會是p到genomic dna,primer有過intron嗎,QPCR產物
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04/01 19:57, , 8F
可以跑膠或sequence確認一下,因為kit有附Dnase
04/01 19:57, 8F
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