[求救] ligation 的正接反接

看板Biotech作者 (rickkao11)時間13年前 (2011/03/23 17:44), 編輯推噓2(2推 0噓 13→)
留言15則, 10人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請問一下大家ligation 的問題 我的insert用EcoR1切一刀，vector也是一樣處理 在ligation時,有可能出現正接會反接的情況 後來進行transformation，是不是會出現同一個E.coli中同時有正接和反接的plasmid ? 請問大家要如何處理這個問題 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97
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03/23 17:54, , 1F
想了一下...這個問題應該不存在
03/23 17:54, 1F
請問為什麼呢？ ※ 編輯: rickkao11 來自: 140.112.121.97 (03/23 17:57)
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03/23 19:29, , 2F
若是這情形的話,那大家都不用挑single colony了
03/23 19:29, 2F
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03/23 19:50, , 3F
colony是來自同一顆菌增殖的吧
03/23 19:50, 3F
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03/23 21:00, , 4F
謝謝您的回答
03/23 21:00, 4F
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03/24 00:44, , 5F
我怎麼覺得這樣回答怪怪的, 我認為要問的問題應該是=>
03/24 00:44, 5F
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03/24 00:45, , 6F
為什麼 一隻菌只會有一種 plasmid存在 ,不過剛看下面有回
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03/24 00:46, , 7F
文了, 至於最終原因我也不太清楚~
03/24 00:46, 7F
推
03/24 16:50, , 8F
不然就想辦法切兩刀唄
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03/24 18:54, , 9F
始終覺得單一切位很難接,容易自接,因為我討厭加cip :(
03/24 18:54, 9F
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03/25 11:24, , 10F
請問樓上G大~為啥不喜歡Cip呀~單純好奇~^^
03/25 11:24, 10F
推
03/25 12:21, , 11F
我也討厭加CIP~~麻煩然後有時後會CIP不完全～感覺CIP這一步
03/25 12:21, 11F
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03/25 12:22, , 12F
好抽象阿～～
03/25 12:22, 12F
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03/25 15:35, , 13F
怕不完全的話可以多加幾次CIP做久一點
03/25 15:35, 13F
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03/25 21:27, , 14F
CIP會把我的DNA.....吃掉.....曾經發生過的囧事....
03/25 21:27, 14F
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03/25 21:29, , 15F
而且多做一步純化.感覺內容物會越複雜? 只是感覺的問題...
03/25 21:29, 15F
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文章代碼(AID): #1DYS3r9T (Biotech)
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