[求救] luciferase reporter該在甚麼時候transfect進去呢?

看板Biotech作者 (FENOR)時間13年前 (2010/12/19 16:47), 編輯推噓4(4推 0噓 8→)
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小弟目前正在做ko某個gene對於ER stress的影響， 然後老師要我同時做luciferase assay。 目前的做法是: Day1:transfect shRNA Day2:換medium Day3:送luciferase assay reporter進去(要看的不是被ko掉的gene) Day4:換medium Day5:lyse cells 拿去測 可是現在有個問題，在Day3的時候，有時細胞就已經長的頗多(高過六七成滿了。) 那我能不能在Day1的時候直接把要測的reporter一起送進去呢? 或者說在Day2送。 因為上次這樣做測出來的值相當的邪門，做為 consititutive active control的Renilla的值低到不可思議。 只有個位數或二十幾。 懇請建議 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.135.214
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12/20 01:32, , 1F
如果把 shRNA 和 repoter 同時transfect呢?
12/20 01:32, 1F
推
12/20 09:59, , 2F
推樓上...另外 會不會是day3再一次transfect的效率低?
12/20 09:59, 2F
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12/20 10:30, , 3F
renilla的promoter若為TK，以下面paper為例，會受影響
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12/20 10:30, , 4F
12/20 10:30, 4F
推
12/20 15:38, , 5F
順序顛倒,也就是先送reporter呢?
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12/20 22:52, , 6F
目前正在嘗試一起送
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推
12/21 11:29, , 7F
話說我們家的pRL-TK也都讀不到值,害我都用其他方法做對照
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12/22 00:23, , 8F
如果不行的話，考慮一下CMV-RL
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推
12/23 22:48, , 10F
也可以考慮一下 transfection 時的細胞滿度。不同試劑
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12/23 22:49, , 11F
需要不同的細胞滿度才能達到最好效果。EX:lipo, CaPO4..
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12/30 22:25, , 12F
最剛開始一起transfect進去看起來是reproducible
12/30 22:25, 12F
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