[求救] 關於Ubiquitin的實驗

看板Biotech作者 (一層)時間15年前 (2010/11/29 23:19), 編輯推噓2(2推 0噓 9→)
留言11則, 4人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
不好意思，想請問一下有人有做過ubiquitin的Western blot嗎? 我的實驗是將target protein Immunoprecipitate下來，然後再去blot ubiquitin (endogenous IP,非overexpression system) 想請教一下要如何才能壓出像paper那樣的ubiquitin smear， 在實驗步驟上是不是有要特別注意的地方呢? 感恩 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.130.90
推
11/30 02:15, , 1F
加proteasome inhibitor,例如MG132.不過前提是你要看
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的是K48 poly-ub
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11/30 10:49, , 3F
謝謝^^~不過我想要做的是K63的 好像比較難看到
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11/30 10:59, , 4F
要做K63的話,看你知不知道你的target protein的E3
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用overexpression E3來增強你的K63 poly-ub
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或是說知道哪些signaling能triger,外加刺激試試看
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恩 感謝 我有加paper加的刺激,但壓片時還是壓不到 Orz
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推
11/30 12:03, , 8F
有加NEM嗎?
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11/30 14:36, , 9F
有^^
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12/01 13:26, , 10F
anti-ub antibody是FK2嗎?
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12/01 14:30, , 11F
我們家是用santacruz的(paper上寫的) 難道這是關鍵!?
12/01 14:30, 11F
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文章代碼(AID): #1CyyIVl1 (Biotech)
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