[求救] 請問genomic DNA在TE中要多久才完全溶解?

看板Biotech作者 (Wacha)時間13年前 (2010/11/06 04:20), 編輯推噓5(5012)
留言17則, 7人參與, 最新討論串1/1
我用 QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit 抽 mice C2C12 cells 的 genomic DNA,根據protocol描述: Resuspend the DNA in 0.1-2 ml of a suitable buffer (e.g. TE) Dissolve the DNA overnight on a shaker or at 55C for 1-2 h. 可是我先搖 overnight 再放 55C 2小時,測DNA濃度大約只有40 ng/ul ,放-20C 冰箱隔天好奇再測一次濃度,就超過 200 ng/ul,個人認為 之前的步驟不足以完全溶解DNA。 這次抽完genomic DNA 打算在室溫下搖個三天三夜,請問不會有什麼 副作用呢? 謝謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 128.32.214.112 ※ 編輯: Wacha 來自: 128.32.214.112 (11/06 04:27)

11/06 06:22, , 1F
我抽酵母菌的gDNA一小時就溶了,濃度都好幾千ug/ml
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11/06 06:23, , 2F
忘了說我溶在二次水而以
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11/06 14:18, , 3F
是不小心overdry了嗎XD
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板上有文章說酒精殘留會影響後續實驗,所以我dry到看不到液體為止。 請問overdry會發生什麼事呢? ※ 編輯: Wacha 來自: 99.30.227.160 (11/06 14:27)

11/06 17:55, , 4F
gDNA過乾極為難溶,最好在溼溼的情況下回溶
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11/06 17:56, , 5F
一般55度水浴配上慢速shaking,3~6小時就可以了
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11/06 17:57, , 6F
接著冰-20隔天再測濃度會溶得較為完全。
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11/06 20:25, , 7F
乾到pellet看不到我溶了六小時都溶不完全,濕濕的一小時就很
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11/06 20:26, , 8F
完全,所以真的不要放太乾
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受教了,謝謝你們! ※ 編輯: Wacha 來自: 99.30.227.160 (11/07 07:01)

11/07 23:57, , 9F
太乾DNA貌似會denature
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11/08 14:04, , 10F
我也都是dry到全乾,看不到pellet. 可是都很好溶阿,
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11/08 14:08, , 11F
濃度都很高耶~ 我都pippet幾下就去測濃度了~
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11/08 15:11, , 12F
懷疑樓上抽出來的DNA比較短......
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11/08 17:06, , 13F
抽出來比較短是...?? 不過我後面實驗都沒啥問題唷!
11/08 17:06, 13F

11/08 17:27, , 14F
我是推測你的DNA可能有片段化,所以好溶(分子量較小)
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11/08 17:30, , 15F
隨機斷裂對實驗影響一般不大,除非很不幸都斷在重要處
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11/08 18:49, , 16F
原來如此! 謝謝樓上! 我只是p 2百多bp的片段而已 xd
11/08 18:49, 16F

11/09 16:46, , 17F
不用那麼乾 酒精蒸發很快
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文章代碼(AID): #1Cr6SCMc (Biotech)