Re: [求救] 關於BD RACE 的實驗primer合成?

看板Biotech作者churchfire (別小看我...)時間13年前 (2010/10/05 13:53)推噓1(1推 0噓 7→)

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※ 引述《churchfire (別小看我...)》之銘言： : 已爬文! : BD SMART RACE cDNA Amplification Kit : 內附的primer,可以去自己合嗎?因為此kit太貴了! : 請問板上的各位,有沒有自己合成做出來的經驗?? : 另外酵素使用其他牌的酵素!! : 如reverse transcriptase的酵素用I牌,RACE PCR再用其他牌的Taq!!! : 以上希望有經驗的大大,分享一下!! : 謝謝!! 感謝大家的回覆!! 如果RACE自己合primer並配合他家酵素完成! 我是按照BD clontech的RACE手冊合成primer! 我RT的酵素也是使用clontech SMART Scribe RT 但是我打電話去問廠商他說因為這支酵素是RAN dependent DNA polmerase 要作5'RACE的部份,因為5'端要接dG,所以接上去的部份應為RNA template 所以這條primer必須合成RNA primer!! 這樣RT的效率才會高!當然後續的PCR也會有好的效率!! 所以問題1 想請教:這幾條primer是僅作一般的DNA primer而已嗎?還是有把它做modify!! 問題2 如果知道基因的ATG起始位置後約900bp,但後面就不知道了! 那可不可以用total RNA 反轉錄合成cDNA後(primer為oligo dT) 設計兩條primer(revese為oilgo dA，forward為基因的前端序列)去PCR嗎? (以cDNA為template) 如此就可以得到全長和3'UTR? 請問這樣做可以嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.69.175.253

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Ianthegood

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Ianthegood

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Ianthegood

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