[求救] 關於實驗上細胞選用的問題
大家好~最近要報告一篇paper
但是之前沒有接觸過細胞跟動物實驗(之前做酵母菌)
因此有一些應該是很基本的地方有點不太清楚
也沒什人可以問
我也有努力去查很多資料,但因為真的沒碰過,所以還是不太清楚
拜託有人可以幫幫我,稍微解釋一下
首先他選用HEK293細胞利用RNAi的方式降低A基因的表現
接著作者希望在老鼠上利用cre-loxP的方式KO A基因
但是所有的胚胎都死亡
之後發現在老鼠的肝臟可以專一性的KO A基因
接著作者又利用A基因KO的mouse embryonic fibroblasts(MEFs)
它是利用表現CRE的病毒去感染MEFs達到剔除A基因的目的
首先我想問的是
1.為什麼要再利用MEFs去做HEK293已做過的實驗,因為它是primary cell嗎???
結果會比較可信???那為什麼不要一開始就用MEFs做,因為比較麻煩嗎???
2.為什麼HEK293不用cre-loxP方式剔除,而MEFs為什麼不能用RNAi的方式???
3.還有為什麼A基因剔除的老鼠胚胎會死亡,而經病毒感染的A基因KO的MEFs卻可以活,
是不是兩者根本沒啥關係,MEFs只是一種常用的primary cell而已???
4.最後都有肝臟KO的小鼠,為何還要用MEFs重複實驗,老鼠的實驗結果應該比
MEFs的有可信度吧???還是就只是double check而已???
上面問題對於有經驗的人可能都是很基本的問題,
但是我真的不是很了解實驗上一些選用的細節
麻煩知道的人幫幫我,跟我說一下,也請你多多包含我問了很多蠢問題
真的拜託知道的人救救我,非常感激~~~~~~~~~
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10/01 20:52, , 1F
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