[求救] 用TRIZOL抽RNA

看板Biotech作者 (就是愛發呆)時間13年前 (2010/09/15 14:52), 編輯推噓11(11推 0噓 12→)
留言23則, 13人參與, 最新討論串1/1
我是用TRIZOL抽RNA 加入1ml TRIZOL打散細胞 靜置5min 加入0.2ml chloform 上下混合 靜置3min 離心11000g 4度 15分鐘 取最上層液 之前抽的時候上層液都很漂亮 清澈透明 可是最近上層液都呈現粉紅色>"< 雖然繼續往後作 RNA的品質和轉cDNA、PCR都OK 可是總覺得心裡怪怪的... 請問有可能是什麼原因呢? 我有換一罐chloform 結果還是一樣..????? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.94.157
推
09/15 16:11, , 1F
換一貫trizol阿!
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09/15 17:42, , 2F
MEDIUM沒有用PBS洗乾淨?
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09/15 18:17, , 3F
應該是medium殘留唷～
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推
09/15 18:51, , 4F
我也曾經這樣!!但我不是medium的問題~因為我是直接從血球
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09/15 18:51, , 5F
抽細胞出來用TRIzol抽RNA...也曾經這樣~~後來發現是我加
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chloform之後沒有"劇烈"的vortex...要很強烈的vortex10秒
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09/15 18:53, , 7F
左右...因為chloform是有機溶劑會讓整管分層...你要先打亂
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09/15 18:54, , 8F
分層的界線再使用離心的方式...離完心才會得到清澈水層
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09/15 18:55, , 9F
推測那粉紅色就是沒有離下去的protein(蛋白質要在最下層)
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09/15 18:55, , 10F
這樣你的RNA很容易會不純
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推
09/15 20:13, , 11F
要先打成草莓牛奶色之後才能靜置吧
09/15 20:13, 11F
推
09/15 22:35, , 12F
推樓上 要草莓牛奶色才能靜置
09/15 22:35, 12F
推
09/15 23:06, , 13F
好酷的PROTOCOL~時間跟我們的差十倍....
09/15 23:06, 13F
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"酷"點在哪?
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推
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一般trizol的實驗步驟就是這樣阿? 就算自己配也差不多
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09/16 11:50, , 16F
不會差到10倍這麼久吧
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推
09/16 21:52, , 17F
推4F 應該是不夠劇烈 再粗魯一點試試看吧!
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推
09/16 23:32, , 18F
我之前因為怕RNA斷掉所以不敢vortex太用力..結果離心好幾
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09/16 23:33, , 19F
次...後來看學姊做才知道原來要暴力一點對它XD 雖然我一直
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09/16 23:33, , 20F
心裡有個疑問這樣RNA難道不會斷嗎..>"<
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推
09/17 12:27, , 21F
vortex 10秒而已 還好吧
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推
09/18 18:44, , 22F
用手搖晃30秒
09/18 18:44, 22F
推
09/20 15:25, , 23F
請愛用你的雙手用搖的 30-60秒....(持續~搖到手酸)
09/20 15:25, 23F
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