[方法] 請問western 的transfer buffer

看板Biotech作者 (咩)時間13年前 (2010/09/08 00:34), 編輯推噓5(5推 0噓 17→)
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目前LAB的western transfer buffer配方是Glycine Tris 20% methanol transfer 110 mA O/N 可是染SDS gel 還是有很多沒有transfer 過去 於是我問到別間LAB配方,多加了2% SDS 一樣是110 mA 時間縮短到1 小時,染SDS gel明顯很多都可以transfer過去 但是要收transfer的時候可以看到負極的那半會有很多泡泡 [都在cold room跑] 而且在膠上也會看到有格紋(夾子的框框) 老師是推測溫度可能過高 請問有經驗的大大...加了2% SDS真的會促使溫度過高嘛? 還是我需要降低SDS的含量 (最後收transfer是110 mA 51V 固定mA ) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 112.104.199.14 ※ 編輯: spirithorse 來自: 112.104.199.14 (09/08 00:35)
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2%不會太多嗎@@?
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推
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你要transfer很大的分子量的蛋白嗎?
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格紋好像是因為夾太緊 你有放stir去均衡buffer嗎？
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to bluecsky: 我的protein 70-80 KDa
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to gryou: 我夾的厚度用不加SDS的buffer是OK的
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但是我都沒用stir耶y
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推
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泡泡是你電解水後產生的吧..SDS提供起泡的環境
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另外70-80用你這條件跑沒加SDS一樣過得去..你家原本
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buffer會不會太奇怪了..
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to tsubasawolfy:Glycin+Tris+methanol是我問過最普遍
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的buffer耶
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不需要加SDS. 我都是300mA 放4度C冰箱 跑1.5hr
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對呀 所以才覺得奇怪
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推
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70~80KD完全不用加SDS...用一般條件放cold room跑就好
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一般buffer就跟你用的差不多阿..
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http://ppt.cc/hP!1 附圖是我transfer後的gel很慘耶
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那個實驗室用2%SDS?你們交情不好嗎?一般用量連google都有
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推
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幾% gel? 沒marker我看不太懂哪裡慘 orz
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當然你加2%SDS的是滿慘的啦XD
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歐歐 這是transfer完後的PAGE歐..那還真的是..
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我們lab是直接400mA 4hr 在cold room跑 都很ok
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to bluecsky: 我下次試試看 謝謝^^
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