[求救] 如何使用chitin bead 純化?

看板Biotech作者 (大同牌電子鍋)時間13年前 (2010/08/30 16:36), 編輯推噓5(5推 0噓 19→)
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我需要做出一張SDS－PAGE的圖片，上面必須出現S.IS.DTT.及CBD加熱 如果利用Chitin bead純化，要怎麼做出?(我需要方法及步驟) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.240.242.197
推
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你用哪一種intein?
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08/30 19:16, , 2F
方法與步驟 一般純化沒有絕對的標準程序 都要看你case
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當然也不能說沒有一個標準做法 你可以參考做過的paper
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或是官方的一些條件 然後自己修改來配合你的東西
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08/30 19:18, , 5F
因為你說的不清不楚 連表現的host 使用的tag都沒講清楚
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目標蛋白多大? 你做過可溶性測試沒有?
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CBD tag一般前面都接了intein 之後elute是靠intein自切
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來做elute 但是intein很多種 你是用哪一種?
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08/30 21:41, , 9F
上面都寫了「加熱」，就下去煮吧，不過活性大概也沒了
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推
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我不太懂的另一點就是加熱要幹嘛 一般DTT可以誘導intein
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的自切反應 然後反應完後就是elute拿到要的蛋白
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之後就用酸 鹼把beads洗一洗就可以再reuse 加熱是..?
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閒蛋白太強了要給他一點挑戰嗎?
08/30 21:47, 13F
推
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加熱就是把bead上面的蛋白質洗下來，完全不管活性
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根據原發問者，就只是要這樣而已
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另外，如果以原發問者所希望的lane的順序，事實上加熱的
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那一組，會呈現的是未切乾淨的融合蛋白＋ChBD-intein兩片段
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推
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那加熱後beads不就報銷了?
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應該是說...我的質體上有一段pTWIN
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要做chitin-binding doman
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如果要用chitin bead 純化的話那，DTT的片段要如何表現出來
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我要"實驗方法"，因為加熱後我要表現的是我CBD有專一性的
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效果，但是DTT的部分要怎麼加入?
08/31 00:46, 23F
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文章代碼(AID): #1CUssJFg (Biotech)
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