Re: [討論] ELISA IL-31 for Serum
: 最近在做IL-31的ELISA
: sampel是human serum
: 使用的是廠商coating好的kit
: 只需要自行加入二抗及呈色劑
: 做了兩盤(96well)後
: standard curve都能達到0.99以上
: sample測出來的OD卻都很低(約<0.3)
: 所以濃度算出來都是負值
: 第一盤做完以後
: 我有詢問廠商是否有人跟我情況一樣
: 有甚麼解決的方法
: 原廠答覆是
: 可以嘗試將抗體dilute的溶劑
: 由無菌水換成含1%BAS的PBS
: 結果第二盤整個OD range壓縮
: 但是sample變的很濃
: 問題還是沒解決...
: 想請問做過此組或是類似kit的前輩
: 有沒有甚麼好方法?
: PS:OD以450nm偵測
我想這就是典型的以期望結果做結論而不是以實驗結果做結論!!!
我有遇過你這種情形,
U937細胞上清液測 IL6 TNFa IL1B
我是用pierce coat好的kit
情況跟你一樣standard curve狠準0.99或1，但是sample的吸光值或濃度變動很大
唯一比較一樣的是推算濃度都是負值。
一開始老闆和我以為是我實驗操作的問題,但最後找出以前人做出的microarray data
和我的ELISA比對才發現，我對U937作的處理根本不會造成他分泌上述3種發炎因子
array data和我ELISA data相呼印
就我來看你的敘述
1.要相信自己的DATA
從你敘述standard curve狠準就應該排除kit 瑕疵或人為操作不當，standard除了當作
濃度推算外還是一種internal control
2.如果測出來是濃度負值應該要考慮是否不會分泌這種因子
數字變動大或是值會跳動是因為分泌不足以測得，或值實在太低超過機器或kit的
limitation
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