[求救] serum要如何跑SDS-PAGE

看板Biotech作者 (appol)時間14年前 (2010/06/02 23:56), 編輯推噓4(4推 0噓 14→)
留言18則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
最近開始在用serum當sample來做western blot 但都發現蛋白再sds-page時都會卡在55kDa的位置 是我用的血清濃度太濃嗎?? 還是我加熱變性不夠? 亦或是我gel得濃度太高; 10%的 runing gel 另外以serum sample跑 western blot 要用怎樣的蛋白當control? actin 行嗎? 這兩天快被這些的好煩喔 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.44.131.28
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06/03 00:31, , 1F
heavy chain?
06/03 00:31, 1F
推
06/03 01:25, , 2F
沒有control就自行外加control~大家加等量的protein~
06/03 01:25, 2F
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06/03 01:26, , 3F
或大家一起定體積即可~畢竟serum本來就沒有適當的control
06/03 01:26, 3F
推
06/03 10:54, , 4F
先找到合適的稀釋濃度 因為血清內太多蛋白質 如果沒找
06/03 10:54, 4F
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06/03 10:55, , 5F
到合適濃度 很容易就卡膠XD 至於internal control
06/03 10:55, 5F
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06/03 10:55, , 6F
你要去找paper中在妳的那種serum中恆定的蛋白即可~
06/03 10:55, 6F
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06/03 11:17, , 7F
actin可以
06/03 11:17, 7F
推
06/03 12:58, , 8F
樓上~為什麼extracellular的serum中會有actin?!
06/03 12:58, 8F
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06/03 13:00, , 9F
說albumin還比較有機會吧?但會因medium量有差而有差異吧?
06/03 13:00, 9F
推
06/03 15:33, , 10F
給你CONDITIONAL MEDIUM跑WB做參考可否?
06/03 15:33, 10F
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06/03 15:33, , 11F
收完MEDIUM後以COLUMN濃縮~定量完後直接loading跑WB
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06/03 15:34, , 12F
INTERNAL CONTROL用PONCEAU S染色拍照就好~ACTIN不可當做
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06/03 15:36, , 13F
INTERNAL CONTROL~不過濃縮要很久~大概兩三小時跑不掉
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06/03 15:37, , 14F
定量定得好就可以了~定準一點吧~我是用BRADFORE定~參考!
06/03 15:37, 14F
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06/09 14:16, , 15F
因為隔壁實驗室 有使用actin來當做internal control
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06/09 14:17, , 16F
但後來又去找他們討論 認為直接定量 比較合理 不過他們也
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06/09 14:18, , 17F
都還是會多跑個actin看看,也許是實驗室長久以來的作法
06/09 14:18, 17F
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06/09 14:19, , 18F
還沒更換作法. 在此先道歉 我推文太不經頭腦了
06/09 14:19, 18F
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文章代碼(AID): #1C1dybSz (Biotech)
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