[求救] 請問293T做transfection
大家好
小弟最近才開始做細胞實驗
用293T cell line做transfection
目的是要表現某個基因，收蛋白做EMSA
使用6cm dish
2.5ml DMEM (no FBS)+5ul plasmid(1ug/ul) + 5ul lipofectamine 2000
加入後隔天把meduim吸掉加入含有FBS的DMEM
但是
本來都好好的
但把medium抽掉並加入D含FBSMEM後
所有細胞都 "漂起來了"
即使我是從dish的壁緩慢加入也是一樣
本來是貼著底部的
後來幾乎全部細胞都漂起來了
而且漂起來後也不會貼回去
所以就不能用了
有給其他養過細胞的同事看過
他們認為細胞其實沒有死掉
後來我就乾脆不換medium
直接transfection 48hr
今天看48hr的細胞其實還OK
但是我抽ptotein的kit中寫道
把medium抽掉後要用cilled PBS洗一下
所以我今天就用PBS洗了一下(用1000 pipetman由dish壁緩慢加入)
加下去就馬上吸起來
還是很多細胞一加下去就漂起來了
最後雖然還是有繼續做下去並把protein抽完
但我損失了蠻多細胞的
所以293T transfect後加入東西(medium,PBS)會漂起來
一直很困擾我
而且我也不知道為什麼不會再貼回去
請問有做293T的朋友可以提供解決方法嗎
謝謝各位
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