[求救]關於 長片段的TA-cloning

看板Biotech作者 (dj)時間14年前 (2010/05/22 02:35), 編輯推噓4(402)
留言6則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我要將 差不多 6.3k的 PCR product insert 入 3.6 K的 TA vector 但是 頻頻失敗 目前用過的 莫耳比為 6.3K product : 3.6K vector = 1:3 我是將 vector 當作 insert看待 因為 product>>>>> vector 但是 仍是失敗 有學姊是比較反其道而行 他的比例是 6K product : 3K vector = 8 : 1 (接下來會試看看) 做出來了, 可是我不知道 其理論是甚麼!? 請有做過類似實驗的大大 給個幫助一下 ~"~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.121.1.64

05/22 03:47, , 1F
把大的insert當作vector,特殊的insert可以換一下cell看看
05/22 03:47, 1F

05/22 05:05, , 2F
因為你合起來大概快10k 有時候比較大要一點運氣
05/22 05:05, 2F

05/22 05:06, , 3F
可以嘗試heat shock時間拉長跟recovery時間拉長
05/22 05:06, 3F

05/22 08:09, , 4F
推1F,不要被名稱給侷限了,誰比較長,誰就當vector
05/22 08:09, 4F

05/22 12:14, , 5F
primer放切位直接用ligase會不會比較快
05/22 12:14, 5F

05/22 13:36, , 6F
感謝解答 值得玩味 再試看看
05/22 13:36, 6F
文章代碼(AID): #1Bzj9tTv (Biotech)
文章代碼(AID): #1Bzj9tTv (Biotech)