[求救] 如何將空vector轉大量?

看板Biotech作者 (elmo軒)時間14年前 (2010/05/21 17:49), 編輯推噓3(3推 0噓 20→)
留言23則, 7人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
各位朋友大家好~~~ 小朋友我有一個問題想請教 我最近要做clone 要把PCR的片段放到之前學姊留下來的空載體 空載體的型式 我想它是Plasmid 但剩下的不多 老師說 把它加水 再拿去做transform 這樣就可以有大量了 因為從沒做過這部分 我可以理解Transform之後可以有很多的colony再去抽plasmid 但是加水.... 這部分我不懂 是要加多少 一定不是隨興所至吧~~ 可以請大家幫我看看 或是有其他方法把我所剩無幾的vector變多~~~~ 謝謝大家!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.124.250.117
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05/21 17:59, , 1F
答 : 就是隨興所至 要不然直接把competent cell丟到那個
05/21 17:59, 1F
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05/21 18:00, , 2F
空管子去也可以 單純的plasmid去transform效率一般都很高
05/21 18:00, 2F
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05/21 18:00, , 3F
不過不要加太多就是了 看你開心 不要加個1ml就好了..
05/21 18:00, 3F
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05/21 18:01, , 4F
其實要是不是空管子的話 取各1ul就很夠拿來轉了..
05/21 18:01, 4F
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05/21 18:33, , 5F
別加太濃 要不然clone長太多你會欲哭無淚
05/21 18:33, 5F
推
05/21 19:20, , 6F
個位數ng的plasmid就可以長的欣欣向榮..
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05/21 19:20, , 7F
如果太濃明天你會看到整盤的細菌平原
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05/21 19:21, , 8F
取一點分裝dilute,用光就沒了,plasmid太濃的話不會長
05/21 19:21, 8F
推
05/21 19:25, , 9F
其實你也可以不要全部的pellet都塗下去阿..
05/21 19:25, 9F
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05/21 19:26, , 10F
雖然說只要幾ng就很夠了 不過我也不知道他說得很少
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是多少 是體積都少到沒得吸那種 還是...?
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05/21 19:27, , 12F
不然其實去定各量也不錯 雖然做久了都不太管這個XD
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一般transform純plasmid的話 我是不會把菌全部都塗下去
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05/21 22:20, , 14F
我之前做transform是用75lamda的勝任細胞+5的DNA
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05/21 22:21, , 15F
所以我取1 lamda的plasmid在家4 lamda的水去轉
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10ng的plasmid就夠了 細菌製備良好的話長幾百顆沒問題
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請問這樣的量ok嗎? 還是勝任細胞這樣太多了?
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05/21 22:23, , 18F
我不知道載體的濃度多少
05/21 22:23, 18F
推
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可以定量阿 很少體積的話 去看有沒有naoa-drop
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05/21 22:34, , 20F
我倒覺得你不用想得太多 就取一點點去轉 要是怕長太多
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你轉完後就不要全部的菌都塗盤就好...
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05/22 12:14, , 22F
ok 我先試試看 謝謝大家的幫忙
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05/22 23:10, , 23F
total>500ng plasmid的話, 建議四區劃線
05/22 23:10, 23F
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