[求救] 關於western的二抗亂抓

看板Biotech作者 (熊)時間14年前 (2010/03/07 18:59), 編輯推噓9(9推 0噓 10→)
留言19則, 10人參與, 最新討論串1/1
小弟目前的實驗室很看重western 可是mouse的二抗(upstate)用1:5000 TBST稀釋後 常常會亂抓actin，強度又很強 所以那附近的band如果較弱， 壓片出來常常被actin的band蓋過去 不知道有沒有大大遇到這種問題？？ 有沒有解決的辦法？？ 目前我只想到剪membrane時把actin剪掉而已 或著換一家二抗看看？？(不過老師大概不會同意) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.154.12
推
03/07 19:57, , 1F
一次壓一種，分開壓
03/07 19:57, 1F
推
03/07 22:30, , 2F
同意 一次就做一種就好 尤其會亂認得話
03/07 22:30, 2F
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03/08 00:54, , 3F
Actin太強了...真的只能分開或剪掉
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推
03/08 01:11, , 4F
押完第一個，elute掉，在押第二種，marker來標定位置
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03/08 01:16, , 5F
是說我沒hy actin的一抗，他就會自己跑出來
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03/08 01:16, , 6F
跑出來每個lane都差不多，不知該高興還難過
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03/08 01:27, , 7F
有人有遇過這種情形嗎......?
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03/08 07:10, , 8F
你怕的話就跑兩張 要不然就是先壓弱的
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03/08 07:10, , 9F
洗掉之後再壓actin
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推
03/08 10:49, , 10F
沒上ab還跑出來...換一家吧= =
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03/08 13:58, , 11F
...那是雜band吧= = 比例再稀釋或wash久一點試試
03/08 13:58, 11F
推
03/08 18:08, , 12F
你有reuse二抗嗎?
03/08 18:08, 12F
推
03/08 18:16, , 13F
是actin嗎？還是heavy chain? 2抗確定有用對嗎？
03/08 18:16, 13F
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03/08 20:03, , 14F
嗯，是actin..我想有真的可能是reuse的關係
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03/08 20:04, , 15F
因為我的actin二抗是mouse，而我的rabbit二抗好好的..
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03/08 20:04, , 16F
重配再試看看好了(實驗室好窮..QQ)
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推
03/08 20:55, , 17F
很可能是reuse的關係 一朝沾過anti-actin 終生anti-actin
03/08 20:55, 17F
推
03/09 11:33, , 18F
所以二抗都通常不會reuse...
03/09 11:33, 18F
推
03/09 17:40, , 19F
二抗太濃,1:10000~20000即可,另外抗體真的不要reuse
03/09 17:40, 19F
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