Re: [求救] western的膠跑起來會分層
※ 引述《mg880613 (Mag)》之銘言：
: 這幾天跑起來的膠一直會有分層的狀況，
: 膠凝時和預跑前都有檢查過，
: 都是完整的下膠不會分層，
: 但是開始跑sample後沒多久，
: 就會在sample底部和下面5 mm左右的距離形成分層，
: 蛋白就卡住跑不下去了......
: 本來懷疑是APS的問題，不過新配以後還是一樣，
: tris buffer ph也定過了沒問題，
: 請問還有可能是哪邊出錯呢?
過年前看到這篇 過完年後回來就遇上同樣的問題Orz
基本上出現的問題都跟你一樣
sample卡住 連Marker也卡住 (第一批sample就跑了不尋常的3小時 第二批就卡了)
stacking會跑 但是很慢 遇到 resolving gel就會停住不動
跑第二批時有注意到電流只剩下10mA (正常是80mA) 理所當然就懷疑膠做壞了
然後經過兩天trouble shooting解決...
第一天 1.新SDS-running buffer stock->DEAD
2.新Tris ph8.8, 6.8->DEAD
3.新acryamide->DEAD 10%SDS->DEAD
4.新APS TEMED->DEAD
第二天 1.換電源供應器->DEAD
2.換電線->DEAD
3.換上蓋(懷疑接觸不良)->DEAD
4.爆氣放大絕 換新一組電泳槽->媽媽 它活了!
後來舊電泳槽拿起來看跟上蓋接觸地方完整 鉑絲也完整沒斷 不過有焦味出現
只好說它老了該退休了一.一
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02/24 00:27, , 1F
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