Re: [方法] fibroblast primary culture

看板Biotech作者 (green)時間16年前 (2010/02/08 17:47), 編輯推噓3(305)
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將組織切小塊 最好是薄片 貼於dish上 放入37 incubator30分鐘後 小心加入DMEM 10%FCS P/S 等fibroblast游出來 約1個星期內就可以看到細胞 ※ 引述《reeuentar (我到底是什麼?)》之銘言: : 有板友培養過人體肌肉中游離出的fibroblast cell嗎? : 學姐留下來的protocol: : 1. 用小剪刀將組織塊剪碎 : 2. PBS每ml加入5ug的collagenase IV,37度30~45分鐘取出上清液 : 4. 置入medium中 : 3. 重複步驟2兩次 : 問題是,之前的貼附率就不高,現在更慘, : 我們用的是GIBICO low glucose的medium,10% FBS,預防感染會加入P/S, : 之前最高是加到10%,也長的很好,最近就長不太起來, : 有人有這方面的經驗嗎? : 有地方要改進嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.120.30

02/09 01:51, , 1F
請問,貼在 dish上時,上面需要放PBS嗎?30min是乾乾的?
02/09 01:51, 1F

02/09 01:59, , 2F
是乾的 才能貼的緊
02/09 01:59, 2F

02/09 09:53, , 3F
不會乾掉嗎?酵素處理過不是應該可以游離出更多嗎?
02/09 09:53, 3F

02/09 10:54, , 4F
我們實驗室不用酵素 用此方法養的很好 提供參考
02/09 10:54, 4F

02/09 15:48, , 5F
加入DMEM時,檢體還在dish底部嗎? 泡一個禮拜?
02/09 15:48, 5F

02/09 15:48, , 6F
(這個方法感覺很實用,忍不住想追問清楚。)
02/09 15:48, 6F

02/09 22:42, , 7F
加入DMEM要小心不讓組織飄起 每三天換新DMEM 等細胞長出
02/09 22:42, 7F

02/09 22:43, , 8F
一個星期後將組織夾起 待2天後分盤或是長滿後分盤
02/09 22:43, 8F
文章代碼(AID): #1BRzscsC (Biotech)
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