[求救] 雙質體的判斷

看板Biotech作者sonix (嘿嘿)時間16年前 (2010/01/05 17:13)推噓2(2推 0噓 1→)

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想請各位幫忙一下判斷質體，實驗是這樣的... 我把一個6.3 kbp的質體送到原本就含另一個5.9kbp質體的E. coli中，這兩個質體確定是相容的，質體抽出來後，以RE切開來看位置，如果沒搞錯或突變的話， 6.3 kbp (vector A)只會被XbaI和SacI切，5.9 kbp (vector B)只會被EcoRI切，我只列出我使用的RE，其他可以切的RE我就沒有列了， transformation後挑了6個colony，都可以生長在含Cm和Ap的LB中，編號由左至右是1-6，第三張圖編號則是1,2,4,5,6，左邊是抽質體後直接跑膠，右邊則是SacI切過， vector A沒有切的話以前有跑過會積在上面，vector B之前則沒有單獨跑過 EcoRI and XbaI digestion http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4246821059/ EcoRI digestion http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4247595206/ untreated or SacI digestion http://www.flickr.com/photos/28317645@N00/4247595278/ DNA ladder 依序是 10,8,6,5,4,3, 2.5, 2, 1.5 kbp 我認為4,5,6是一樣的，於是我保存了no. 1,2,5，如果把各種組合算進去的話，3個看起來似乎都對又都不對@@"，想請教一下有經驗的人這該如何判斷，還需要更進一步的digestion或B單獨跑一次來確認嗎？謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.123.127.45

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skybreeze

01/05 20:51, , 1^F

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chvkimo

01/07 11:08, , 2^F

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chvkimo

01/07 11:08, , 3^F

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