[求救] 送大的植體進DH5啊法~

看板Biotech作者 (redeye)時間14年前 (2009/12/28 15:54), 編輯推噓5(5推 0噓 9→)
留言14則, 8人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
受學長姐之命要送個16Kb的plasmid進DH5a 但是不論用電的用燙的(heat shock)都沒辦法把他老大請到菌裡... 也不知道是不是Ligation的問題= = 接的方法是7K+9K一平一鈍的方法黏接 請問板上的各位高手有甚麼好的意見 謝謝 (__) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.213.184
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12/28 16:16, , 1F
反應條件寫一下 還有你錯字好多...
12/28 16:16, 1F
推
12/28 17:44, , 2F
絕對是ligation的問題，我目前23k用heat shock就可以了
12/28 17:44, 2F
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12/28 18:32, , 3F
說不定是菌的問題 其他人送質體ok嗎
12/28 18:32, 3F
推
12/28 18:34, , 4F
一是沒接上（確認過嗎？）再來就是competent cell沒效了~
12/28 18:34, 4F
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12/29 10:46, , 5F
其他人送都ok~ligation後沒確認...有確認的好方法嗎@@?
12/29 10:46, 5F
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12/29 10:47, , 6F
competent cell ok我有測試其他的plasmid
12/29 10:47, 6F
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12/29 10:49, , 7F
抱歉(__)我會加強國文的~條件: Ligation T4 ligase O/N
12/29 10:49, 7F
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12/29 10:50, , 8F
現在再嘗試4度 2天~之前是一天16度
12/29 10:50, 8F
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12/29 10:51, , 9F
Heat shock 42度90秒~冰2~5分後加LB培養2小時
12/29 10:51, 9F
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12/29 10:52, , 10F
電菌也是電菌後用LB培養2小時後再塗盤
12/29 10:52, 10F
推
12/29 18:05, , 11F
感覺是ligation問題～一平一鈍是什麼意思阿？blunt end?
12/29 18:05, 11F
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12/29 21:21, , 12F
一端blunt 一端sticky
12/29 21:21, 12F
推
12/30 13:18, , 13F
ligation vector 跟 insert的比例呢？
12/30 13:18, 13F
推
01/01 15:25, , 14F
competent cell的frequency 有測過嗎?
01/01 15:25, 14F
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文章代碼(AID): #1BE6Gem0 (Biotech)
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