[求救] PCR的問題???

看板Biotech作者 (Mei-Mei)時間14年前 (2009/12/23 18:38), 編輯推噓11(11015)
留言26則, 13人參與, 最新討論串1/1
最近在PCR鬼打牆的狀態 Orz 覺得PCR真的是很tricky的一個東西> <" 在測試狀態以及P第一批10隻檢體的時候都還滿ok的 沒有雜band只有一排整齊的dimer出現(這是預期的結果) 但是我接下來要做下一批的時候, 明明就是同樣的條件跟同一對primer 但不是怎麼P都有很多條雜band, 就是一點東西都P不出來... 已經做了兩次的結果都這樣 懷疑是不是污染也加上了negative control,確定了沒有其他東西污染 明天要討論一下是不是要換一對primer... 可是還是覺得很奇怪,為什麼同樣的條件跟primer會跑出不一樣的結果阿 我是不是該去拜拜了.........> < -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.150

12/23 18:42, , 1F
我P過ㄧ個月,空空如也,老闆說休息幾天,還真的有東西了
12/23 18:42, 1F

12/23 18:45, , 2F
對!!有時候超奇怪的~ 隨意做反而有東西~真正小心的時候
12/23 18:45, 2F

12/23 18:46, , 3F
卻空空如也!! 或許這幾天我心情都滿緊繃的吧
12/23 18:46, 3F

12/23 19:09, , 4F
P成功的東西留一點當positive?
12/23 19:09, 4F

12/23 19:09, , 5F
我是指檢體不是P出的產物
12/23 19:09, 5F

12/23 19:16, , 6F
有~我有把第一次P出來的檢體再拿出來當PTC 一起P一次~
12/23 19:16, 6F

12/23 19:16, , 7F
結果跟第一次結果不一樣,出現了很多雜band,不知為什麼
12/23 19:16, 7F

12/23 20:18, , 8F
PCR 這種東西,感覺就是運氣運氣,去拜拜一下吧!加油~
12/23 20:18, 8F

12/23 20:21, , 9F
恩,不過也想知道是哪邊出了問題, 這個實在是很神奇
12/23 20:21, 9F

12/23 20:23, , 10F
手氣出了問題吧?(逃...)
12/23 20:23, 10F

12/23 21:11, , 11F
恩~我想去拜拜XDD 然後再討論該怎麼修改實驗的條件...
12/23 21:11, 11F

12/23 22:34, , 12F
要檢查的東西太多 當碰運氣吧
12/23 22:34, 12F

12/24 13:54, , 13F
把anealing time改短一點,溫度也降一點試試看
12/24 13:54, 13F

12/24 14:25, , 14F
我通常是砍掉重練 (認真中)
12/24 14:25, 14F

12/24 17:44, , 15F
同意樓上...試劑都換掉吧!重作比較快
12/24 17:44, 15F

12/24 17:53, , 16F
恩...我會換一批...休息個一天再重新出發!!被PCR弄到很煩
12/24 17:53, 16F

12/24 18:02, , 17F
可是a大,降低溫度的話不是會出現更多的雜band嗎??
12/24 18:02, 17F

12/24 18:03, , 18F
我的預期結果只有primer dimer出現最好不要有任何的雜band
12/24 18:03, 18F

12/24 19:08, , 19F
跑個gradient看看吧
12/24 19:08, 19F

12/25 11:27, , 20F
可能是primer已經degrade了!
12/25 11:27, 20F

12/25 11:44, , 21F
這種情況真的很煩 到最後會開始懷疑是不是PCR機器有問題
12/25 11:44, 21F

12/25 16:19, , 22F
謝謝大家的回答~~討論的結果是可能要重新設primer了
12/25 16:19, 22F

12/30 14:05, , 23F
我也是耶,做一整個月都重現不出來,明明上個月才做過
12/30 14:05, 23F

01/05 00:56, , 24F
有可能機器壞掉了~升降溫不正確結果就會怪
01/05 00:56, 24F

01/05 12:05, , 25F
我後來做出來了 把templete DNA 降到0.3ug(genomic DNA)
01/05 12:05, 25F

01/06 16:38, , 26F
很奇怪阿 有時候條件都一樣但都無法重現 條件都要重設
01/06 16:38, 26F
文章代碼(AID): #1BCVCc4t (Biotech)