[求救] EMC virus working bank 建立
板上各位先進好
因為剛進入實驗室做專題,指導教授要我先建立一個 EMCV working bank
但是因為實驗室學長姐都畢業了
雖然找了很多資料,依然有些地方不懂,想請教大家
1.病毒株是由國外購買回來,預計用 Hela 放大
請問一開始我要加入多少病毒到多少細胞內 ?
因為我上ATCC 有看到其他株病毒放大的的建議用量(0.1 MOI),
但這株細胞沒有,所以請問有建議用量嗎 ?
2.ATCC上面寫 incubation time 是 4 days,
請問我是四天後收上清夜就冷凍起來嗎 (-80 ? ) ?
需要加抗凍劑嗎 ?
需要在冷凍前以 0.22 filter 去除細胞碎片嗎 ?
3.預計實驗的操作流程如下
a.從 flask 上取所需細胞數目 (約 1ml) 加入病毒感染, 室溫反應 30 min 後
再將細胞貼回 flask 內, 加入約 9 ml fresh medium,
於 incubator 內感染 4 天
(protocol上寫 可以 90 rpm 輕微擾動, 請問需要嗎 )
b. 以顯微鏡確認有 80% CPE 後, 取上清液過 0.22 filter
直接凍到 -80 內
不知道上述步驟有沒有需要改進的地方
另外不知道有沒有關於病毒操作步驟相關可參考的網站
有上去 Springer Protocol 看過, 但好像都沒有這些比較基礎的 protocol 可參考
以上, 先謝謝大家
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