Re: [求救] 請問關於transfection
※ 引述《anchi (我家有隻可愛小都)》之銘言：
: 請問,使用lipofectamine做transfection
: 和用virus infection, 結果有何不同呢?
: 以下是我對此二方法的想法:(可能有很多錯誤請大家幫我指正)
: 假設我要將一個基因送入細胞株讓他表現.
: 一般可選擇可在真核細胞表現的vector(ex:pcDNA3)或
: virus vector(ex:retrovirus vector)來攜帶此基因.
: 假設用pcDNA3攜帶此基因,再用lipofectamine送入細胞,
: 經過抗生素篩選一段時間,可得stable cell line.
: 如此可將此珠細胞冷凍保存,每次實驗需要再取出培養.
: 假設用virus vector攜帶此基因,則需先送入packaging cell,
: 製造virus, 再去infection 目標cell.
: 而被感染的細胞雖然會表現此基因,但細胞被病毒感染不久後也會死亡.
: 似乎無法穩定保存.
retrovirus 有個特性你忘記囉
去查查看
這樣你就會知道用virus infection的方式是可以穩定保存的
且花費的時間比用一般vector送進去挑stable clone來的短
所以不用再從package開始
: 每次需要此細胞時須從vector送入packaging cell步驟開始...
: (好像沒看過直接用lipofectamine直接把virus plasmid送進目標細胞株,why?)
: 這樣看起來好像使用一般真核細胞表現vector的方法比較簡單也比較能保存.
: 但是virus infection卻也是實驗是很普遍的方法.
: 請問大家這兩種方法transfection的結果差異或優缺點在哪裡呢?
episome:
簡單快速方便，一般P1 lab就可操作。缺點是不同cell line transfection efficiency
會有很大差異，像一些難搞的cell line (ex:HepG2)就算用萬惡的(價格上)
lipofectamine2000 效率也不大好
virus infection:
需要P2 lab才能操作(除非你偷做)，優點就是efficiency極好(MOI可以控制)，個人
推薦XD，至於你問的why那個問題，你去翻翻拿來做virus的plasmid裡面的map就知道
原因
歡迎大家分享心得和補完
: 不好意思若我有些觀念錯誤請大家幫忙指正,謝謝!
: :)
: ※ 編輯: anchi 來自: 125.231.224.69 (11/13 20:00)
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