[求救] 請問SDS-PAGE鑄膠和跑膠的問題

看板Biotech作者 (復刻回憶)時間14年前 (2009/10/29 22:15), 編輯推噓9(9推 0噓 26→)
留言35則, 10人參與, 5年前最新討論串1/1
請問各位 1. 鑄膠的時候 resolving gel加進去之後 是馬上加酒精把下層膠壓住嗎? 等到差不多凝膠之後 是用倒的把酒精倒掉嗎?? (因為用來mix的燒杯裡還會剩一點膠 我發現膠凝了之後上面還會有一點液體耶???) 2. 學長是說做好的膠直接泡在自來水裡 冰在4度C 但是我爬文看到大家都說要泡在RO水或是稀釋的running buffer裡 因為我是一次做4片膠 前兩片通常都跑的都還不錯 後兩片就會變很醜 不知道是不是保存方法不對的關係?? 3. 我是每個well都會loading一樣的體積 只有marker除外 但是我的marker越往下跑變越窄 要如何改善呢?? 感激不盡!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.160.170.174
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泡太久SDS跟tris不是會析出嗎@@? 第三點蛋白濃度調低
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可是沒辦法一次做1片耶~ 你是說sample濃度調低嗎??
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推
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第三點 是因為sample體積大於marker所以marker band會壓
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縮
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關於第一點 用倒的就可以不過要等酒精都乾掉才可以配上層
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關於第二點 覺得後兩片不是因為保存有問題而是配膠有問題
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sample體積不是一直都比marker多嗎...
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但是我如果load完marker再加sample buffer補到一樣體積的話
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marker就會被擠到兩個角落 跑出來的都好像中間斷掉一樣...
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marker被擠壓到一定就不會越來越短 實在沒有必要補體積
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抱歉沒辦法幫你解決問題
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我的marker是加3ul 會太少嗎?? (感謝樓上的經驗分享喔)
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阿你marker可以先取出來再加sample buffer到跟其他sample一
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樣的體積阿
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關於第一點 注完馬上就壓嘍 用什麼都可以啦 凝了直接倒掉
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有人用二次水 酒精 isopropanol iso-butanol 都有
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那個不凝的部分是因為接觸到空氣 只要接觸到空氣就凝不完全
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所以有的人的齒槽一直都會下縮 就是因為他的膠接觸到空氣
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很久很久以前上課 好像是說因為 TEMED 被氧化掉了
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關於第二點 冰冰箱裡不能冰太久 幾天內就用掉比較好
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從冰箱裡拿出來要先回溫 讓析出的東西溶回去 XD
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泡水可能會讓膠內的 SDS 跟 tris 濃度不太對 pH 值也會變
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我以前也是用泡水的 現在改用濕的擦手紙包起來放夾鍊袋
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第三點 不是用 sample buffer 是用溶樣品的 buffer 補體積
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這是個人的小小經驗 囧a
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膠用保鮮膜包好就好啦 通常頂多放一個晚上就用掉了
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第二點同Anvec 不過擦手紙是用sample buffer浸溼的
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膠泡水存放的確要考慮被稀釋的問題，放個幾(<5)天倒也還好
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我通常也是用擦手紙包
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sample buffer不就是溶樣品的buffer嗎 (裡面有染劑的那個)
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還是大家說的是running buffer??(跑膠的時候要倒在槽裡的?)
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我想mea大應該是筆誤 用running buffer保存膠會比水好
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是說...為什麼不能一次做一片？@@"
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關於第二點 覺得後兩片 https://daxiv.com
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01/03 17:02, 5年前 , 35F
很久很久以前上課 好像 https://daxiv.com
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