[求救] 蛋白質濃度定量 for SDS-PAGE

看板Biotech作者 (情人去死)時間16年前 (2009/10/10 19:43), 編輯推噓0(005)
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抱歉,問個笨問題 bradford assay測濃度,BSA建standard curve duplicate,96-well plate sample 10ul+ 190 bradford reagent reagent 5倍稀釋 (mg/ml) sample OD1 OD2 average 1 1.0329 1.0275 1.0302 0.5 0.7091 0.714 0.71155 0.25 0.3947 0.439 0.41685 0.125 0.209 0.2159 0.21245 0.0625 0.0833 0.0659 0.0746 Blank 0.0034 -0.0034 100倍稀釋 sample average conc. IP 0.0134 0.0118 0.0126 -7.136746 before 0.0326 0.035 0.0338 -5.095398 A 0.101 0.1 0.1005 1.327145 B 0.0675 0.0707 0.0691 -1.696361 趨勢線的公式:y=0.9629x-0.0835 r square>0.95 1.想請問因為我IP完後,濃度反而低於IP前,是不是我那一步錯誤, 這樣正常嗎? 2.bradford assay測的濃度可以在低嗎?我想建一條standard,濃度到0.0625mg/ml以下 ,我剛抽出來的protein濃度太稀了,因為這是很重要的sample,又有點趕時間 3.超級笨問題 先將sample OD帶入趨勢線公式在乘回稀釋倍數, 還是先將OD*diluent factor? 感激不盡<(_._)> -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.60

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關於問題2 一般認為bradford方法的線性範圍是 0.02-1.2ug/ul
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10/14 00:08, , 2F
可是就像sharkcell所說 越靠近線的兩端越不準
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唉 我數學不好 -_-
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10/14 00:31, , 4F
偷用莊老師的 pdf :D 建議是 0.01-0.05mg
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10/14 00:32, , 5F
我第一個講的是 bio-rad 改良的 kit 0.2-0.9 ug/ul
10/14 00:32, 5F
文章代碼(AID): #1Aq7DcOY (Biotech)
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