[求救] 請問有denature已轉印蛋白的方法嗎?

看板Biotech作者icome (木村阿宅)時間16年前 (2009/10/02 11:21)推噓3(3推 0噓 3→)

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non-boiled and non-reduced proteins已transfer到NC membrane上，請問是否有辦法再將它denature? 原因如下: 我的target protein必須要在沒煮過的狀態下才能被抗體偵測到，可是做internal control的anti-beta-actin抗體要煮過才能認得比較好；有辦法在我偵測完target protein之後，再把membrane上的蛋白denature，然後再去偵測actin嗎? 我之前試過的方法: (1)把membrane拿去煮5分鐘，結果訊號反而更弱...可能太劇烈蛋白掉下來了。 (2)使用高濃度anti-actin抗體去認未煮過的蛋白，結果常會出現訊號時大時小 (煮過後的sample未有此情形) 不知道板上高人有什麼經驗或方法可以解決... 不然只好換一支internal control了... 感謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97

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Rarelay

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turtle24

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