Re: [求救] 抽大量plasmid，isopropanol沈澱後看不 …
今天再次失敗，沈澱後完全看不到pellet Q.Q
qiagent protocol:
昨天晚上七點搖兩百毫升，今天早上七點來離心收菌，冰-30度C，中午一點半回來抽
收菌6000xg 15mins 兩次
然後離兩個50ml離心管，在用10ml的P1混合成一管，
加10ml P2 上下微搖晃 6次，室溫等5分鐘，整管變深藍色
加10ml P3 (pre-chilled on ice)，倒進過濾裝製裡，等10 mins，
用plunger壓，過濾液，加入2.5ml ER buffer，30 mins on ice，
活化tip-500 DNA binding column by QBT buffer
整個到入tip-500 DNA binding column，wash by QC buffer 30ml*2
elute by QN buffer 15ml，加入isopropanol 10.5ml，RT等10mins
離心11900xg 60mins，--->沒pellet，在底部管壁上沒看到任何白白透明的東西...
唉...已經失敗三次了，到底該怎麼辦
※ 引述《pent (情人去死)》之銘言：
: 我用的是qiagent endofree maxi kit
: 搖200ml的菌量，離心後，把全部的菌量用10ml
: 的p1混合成一管，完成依照他的protocol
: 但是最後，用isopropanol沈澱後，一直都看不到pellet
: 第一次測出來，濃度才9ng/ul，根本是沒有抽到
: 做了兩次，都是這樣的結果Q.Q
: 請問該怎樣確認到底是中間哪步驟出了問題?
: 謝謝
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