Re: [求救] GST pull down assay 問題...

看板Biotech作者 (simon)時間15年前 (2009/07/26 01:23), 編輯推噓1(1推 0噓 1→)
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※ 引述《iamrim (笨小孩~)》之銘言： (恕刪) : 問題: : 1.A protein與GST only beads 4度結合2 hrs,PBS+1mM DTT+1%tritonX100 wash3次 : 2Xsample bf去煮beads.跑膠還有A protein signal.就是negtive control做不好. PAGE or western ? : 會不會是A protein 太小卡在bead,怎麼洗都洗不掉......>O< 有試過 A protein + beads only ?? 如果有代表 A 與 bead 有nonspecific binding..... : 2.有換buffer的必要嗎??看別人家好像都有換.imidazole多會影響binding? 你是指 A and B binding的buffer? 如果你的 A and B binding不強..imidazole多會洗掉... : 3.reduced Glutathion去elute跟直接煮bead有差嗎? 直接煮如果是看SDS-PAGE 有可能會比較髒.... 不過western應該就比較沒差~~ : 感謝看完....我已經在GST pull down徘徊已久..... : 希望能早日脫困~謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.171.89.2
推
07/26 18:31, , 1F
western.有nonspecific binding
07/26 18:31, 1F
→
07/26 18:32, , 2F
binding buffer目前換成tris-HCl buffer試試看而非PBS
07/26 18:32, 2F
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文章代碼(AID): #1AQp-NhG (Biotech)
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