[求救] 關於表達蛋白以及製作相應抗體的問題

看板Biotech作者YuDavid (討厭失眠)時間16年前 (2009/07/14 17:00)推噓4(4推 0噓 11→)

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各位高手大家好由於時間有點緊湊同時基礎知識又不夠紮實所以來這邊請教與此同時我也會多查點資料做功課謝謝各位首先三月份開始我們老闆就叫我們表達一個叫做PepT1的protein 這個蛋白是一個有12個transmembrane region的transporter 由於對實驗基礎知識缺乏今天才知道原來transmembrane蛋白質沒辦法表達囧至少似乎用傳統的方法(IPTG induction)是沒有東西的@@ 那問題來了我們有個同學說會不會是因為他是binding在膜上所以你不可能把target protein給釣出來跑PAGE當然就沒有band了但是又有個同學說你在E.coli系統裡面做的蛋白未必也會乖乖binding在細胞膜上而可能是疏水作用力（跨膜區域是疏水的）的關係所以translation無法順利進行請問Transmembrane蛋白無法表達的問題是上述哪種或者還有別的原因呢? 那有沒有比較特別的方式/技術可以把我們要的蛋白給做出來呢? 另外我們本來傻呼呼的想要做抗體以後做western甚至IHC 假設真的表達不出來我們只表達某段exterior的部分作western 應該不會有問題吧? IHC似乎就不太可能了吧？因為這個實驗的抗體要求似乎非常高　囧主要的問題如上感謝各位花時間閱讀並指教 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 115.192.191.202

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YuDavid

07/14 17:02, , 1^F

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推

leoblack

07/14 18:01, , 2^F

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leoblack

07/14 18:01, , 3^F

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