[求救] E.coli表現請教
大家好
小弟的實驗有點複雜..
大致上是將兩種plasmid共同transform到BL21(DE3)中
他們分別是pET42-based及pACYC184-based的plasmid
其中pET42搭載一個目標蛋白
而pACYC搭載三個目標蛋白 總共會表現4種target proteins
我的目標是pACYC上的三個蛋白在表現後會對pET42所表現的蛋白進行後修飾...
我要純化被修飾的蛋白...
由於這個pACYC184-based的plasmid是已經有人發表過的東西
所以應該是可以work的，同時我也利用別的plasmid去co-transform過確認他OK的
而我的pET42的蛋白 若是單獨表現 也都可以純化到大量的target protein
只是當我在co-express的時候，pET42的表現量會大幅度的下降
下降到不像單一表現時那種很突出的band,就是雖然有 但是並沒有特別多
目前已經測試過16、25、37度或是時間點上的差異測試
效果都不是很顯著，IPTG的量上還正在測...
只是在想說 在更改什麼條件下 會讓蛋白的總產量增加??
因為似乎不管那種條件都會有一些蛋白跑到Inclusion body裡..
(不過不知道有沒有可能是蛋白跑去把不溶的protein修飾了..)
所以那就想說 使總產量增加的方法也可以...
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