Re: [求救] PC12 Culture 問題
poly-L-lysine是PC12貼附的關鍵步驟
只不過coating我們是用開蓋放在laminar flow照uv到全乾
其他大概跟asophisca差不多
參考一下囉!!
※ 引述《asophisca (小潘)》之銘言：
: 因為我自己現在也在養這一株細胞
: 之前也有發生過這樣的狀況，還以為是我細胞沒有凍好>.<
: 所以提供妳一些方法參考看看嚕
: 1.我養細胞的plate都會先用100 μg/ml poly-L-lysine hydrobromide solution
: (Sigma, no. P6282)coating過，時間是60min，37度。這個很多paper上都有用
: 蠻常見的。coating過以後細胞不太會掉，還不錯。至於妳用的collagen，我也有用
: 只是我是用於要分化的狀態的細胞，就是接著在剛剛的PLL後面再coating一層，
: 10 μg/ml rat tail collagen Type I (Sigma, no. C3867)。這個要先用PBS去稀釋
: ，RT放120min即可。
: 2.剛解凍的細胞要拿出來放到plate養的時候，記得一定要用大孔徑的、
: 至少5ml的吸管去吸，因為我之前就是什麼都注意到了，但是這個沒注意
: 剛解凍的細胞是很脆弱低。
: 3.凍細胞用全FBS去凍，ATCC的建議沒有這樣寫，不過我家的博士建議我這麼做
: 效果也確實很好。(當然也要內含7%DMSO，這就不贅述了）
: 4.細胞剛種下去的時候，不要一直去看它。可以的話隔天在去看，又或是至少要格
: 個半天，不然貼附的黃金時間過了，真的會很難貼。
: 5.凍細胞的DMSO要用最高級culture的，對細胞沒毒性，可以隔天貼附好了再換Media
: 也ok。
: 以上這幾點是我實驗上的實作心得，希望對妳有幫助。
: 也期望其他更厲害的專家不另指教！！感謝囉！！
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