Re: [求救] 關於histone的western blot

看板Biotech作者lenti (啄木鳥)時間17年前 (2009/03/20 17:55)推噓5(5推 0噓 3→)

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※ 引述《stool (要死了)》之銘言： : 最近想要用histone來當我實驗一部分的positive control : 我是用whole cell lysate來跑western : 然後用anti-histone的antibody去測 (anti-H3) : 可是做了幾次都超乾淨什麼band都沒有 : (cell: 293T lysate量大概是20ug/lane) : 因為我之前沒有用過 : 想請問一下histone需要先做purification再測嗎? : 我在想我測不到的原因是antibody的問題還是histone的量本來就很少 : 直接用cell lysate測不到 : (應該不會是western的問題因為我同時有其它sample都有signal) : 謝謝 histone 是可以用whole cell lysate直接跑, 可以不用純化處理. 我有直接用cell lysate 做過, 而且我是WB, H3, Ac-H3, Ac-H4, H3K9me2, modification量會比total histone的量更少, 所以你壓histone H3 是沒問題的. 可能是抗體的問題. 你可以把loading protein 加到 40 ug 試試. 要注意histone 的size 約 17 kDa 左右, 記得用 12% ~ 15% SDS-PAGE 去run. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.125.66

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