[求救]SDS-PAGE, DTT treat後位置錯誤

看板Biotech作者 (洛)時間15年前 (2009/03/18 20:34), 編輯推噓5(5推 0噓 4→)
留言9則, 3人參與, 最新討論串1/1
純化蛋白,SDS-PAGE確認時出現4個band, 為了確定是isoform 還是雜蛋白，同一管取出，分成兩管 A. 原sample + protein dye B. 原sample + protein dye(100 mM DTT), heat 95度 5 min , ice 1 min, 跑 SDS-PAGE，Coomassie Blue 染色後發現 A. 3 bands， 大約48 kDa, 32 kDa, 16 kDa B. 1 band 大約 19 kDa 類似下圖 A. B. __ __ __ __ 想請問為什麼DTT treat 後，會發生位移的情況呢？ 能被解釋或是我有沒有處理好的地方嗎？？？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.61.117
推
03/18 21:01, , 1F
我會比較相信B才是你要的XD 去查DTT作用就知道了
03/18 21:01, 1F
→
03/19 11:16, , 2F
喔喔 另外我的意思是若為isoform 為什麼B不會到16kDa的位置呢?
03/19 11:16, 2F
推
03/19 11:35, , 3F
沒有denature狀態下分子量沒意義吧?
03/19 11:35, 3F
→
03/19 11:37, , 4F
變成只是SDS包附蛋白表面而不是依據完整的包覆
03/19 11:37, 4F
推
03/20 19:19, , 5F
跑SDS-PAGE了幹麻還要加dtt...維持構型?不是要看分子
03/20 19:19, 5F
→
03/20 19:19, , 6F
量嗎....NATIVE GEL 加了比較有意義吧
03/20 19:19, 6F
→
03/20 19:20, , 7F
我也認為B有加熱過DENATURE才是你要的...............
03/20 19:20, 7F
推
03/20 19:27, , 8F
dtt濃度高一點 的確可以打破雙硫鍵 也是有助denature
03/20 19:27, 8F
推
03/20 19:29, , 9F
看你的濃度應該是把雙硫鍵都打斷了吧 變線性的
03/20 19:29, 9F
‣ 更多 ksn 的文章
文章代碼(AID): #19mEfICG (Biotech)