Re: [求救]關於 bisulfite modification 的步驟
你的步驟有些奇怪, 第6步.
我純化完之後, 只用NaOH 處理, 37度, 15 min. 不會再加入 Na-Bisulfite.
然後, 加2.5 Vol 99.9% EtOH, 進行酒精沉澱的步驟.
我用的protocol是參考這篇 Methods 27 (2002): 134-138.
Screening for and analysis of .....
這篇所介紹的方法把modification的流程縮短到5小時.
DNA 純化之後再處理NaOH，當然是有目的的且是很重要的步驟.
這個步驟是desulfurization. 前面用Na-bisufite對DNA進行modification,
DNA 純化之後, 這個修飾並未改變, 因此最後才需要NaOH處理, 置換掉S.以
利之後的PCR.
This NaOH treatment is to remove the bisulfite adduct from the uracil ring.
It is important that this desulphonation step is complete.
而加 Hydroquinone 的目的是保護 DNA 在 depurination過程中不會 strand breakage.
※ 引述《ken0123 ()》之銘言：
: 1. DNA用 2MNaOH 在37℃處理 10min
: 2. 加入250μl(1.5M)的NaS2O5與30μl(10m)的hydroquinone
: 3. 放入熱水浴中50℃、16~18小時
: 4. 使用promega DNA clean-up kit進行純化
: 5. 加入50μl(0.6N)的NaOH靜置五分鐘
: 6. 加入10μ的NaS2O5與500μl(100％)的酒精
: 7. 放在-20℃中靜置20分鐘
: 8. 以12000rpm離心20分鐘，倒去上清液
: 9. 加入500μl(75％)的酒精，以12000rpm離心15分鐘，接著進行抽氣
: 10.加入50μl的ddH2O放置在37℃下1小時回溶DNA
: 以上大概步驟是這樣
: 我想請問有做過甲基化的大大
: 為什麼DNA經過純化之後還要在經過NaOH處理呢?
: 這個是有什麼特別的目的嗎?
: 另外,hydroquinone加在NaS2O5裡面的目的是什麼啊??
: 希望有好心人士可以幫我解答!
: 感激不盡~
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