Re: [求救] 蛋白質純化-產物退冰會沉澱
※ 引述《turtle24 (鄉民龜)》之銘言：
: 使用Ni2+ column純化了數批蛋白質 表現系統是BL21以及BLR
: elute->濃縮->通G25或透析換成PBS buffer->再濃縮->產物
: 產物冰存-70之後再退冰會大量雪花般片狀沉澱 且難以回溶
: 操作同系統的約有四五人 每個人做的都會發生退冰沉澱的情形
: resin中間有換過一次牌子 兩個牌子的純化產物都有退冰沉澱情形
: 請問有沒有方法可以避免上述的沉澱
: 之後產物還需要二次純化以及通S200分離雜band 所以盡量以不影響後續處理優先
: 初步的想法是從存放的buffer-PBS下手 提高鹽類濃度或是添加一些物質
: 感謝解答及提供任何意見
如果還要作第二次純化
是否第一次純化後就不要濃縮（有的蛋白質濃縮後容易不穩定）
不要冰存
直接通第二次管
濃縮時只要看到沈澱發生就停止
若你的protein是enzyme,
加些substrates可能可以穩定你的protein
每個protein的性質不同（我還遇過protein不喜歡低溫，要在常溫下純化）
找些文獻看前人有無任何tricks
Good luck!
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