[求救] western blot

看板Biotech作者 (我不要現在就出征....)時間17年前 (2008/12/22 17:14), 編輯推噓10(10推 0噓 11→)
留言21則, 12人參與, 7年前最新討論串1/5 (看更多)
請問個位大大 小弟在做SDS page 轉漬到PVDF膜上時 我的power是用0.6A跑50mins 但是後來轉漬到膜上時 我的marker的band突然變得好淡 淡到都快看不到marker了 我marker的量是5ul 請大大幫忙解釋一下為什麼這樣? 是我那裡做錯還是我load的量不夠呢~ 謝謝大大們的幫忙 感激感激 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.49.5
推
12/22 17:25, , 1F
我用350mA轉1.5~2hrs...600mA會不會太強了@.@
12/22 17:25, 1F
推
12/22 19:32, , 2F
該不會看到背面了吧?
12/22 19:32, 2F
推
12/22 20:19, , 3F
太淡, 可以多Laod, 不過要確定會不會影響到Western.
12/22 20:19, 3F
推
12/22 22:19, , 4F
你要看的protein大小多大?我通常看100kD以下的都是用
12/22 22:19, 4F
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12/22 22:20, , 5F
300mA 1.5hrs,以上的話就2hrs!有可能是電流太強過頭了
12/22 22:20, 5F
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12/22 22:21, , 6F
怕是沒transfer完全,可以把transfer完的gel去染
12/22 22:21, 6F
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12/22 22:22, , 7F
coomassie!!我的marker都load 4ul,很ok喔!!
12/22 22:22, 7F
推
12/23 07:27, , 8F
染看看有沒有蛋白質吧,transfer buffer新配的嗎?
12/23 07:27, 8F
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12/23 09:12, , 9F
嗯~謝謝大大們的回答~我也覺得電流太強~但我學長說
12/23 09:12, 9F
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12/23 09:14, , 10F
PVDF膜不會因為電流太強而過頭讓marker變太淡
12/23 09:14, 10F
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12/23 09:14, , 11F
所以個位大大還有其他的想法嗎??
12/23 09:14, 11F
推
12/23 09:54, , 12F
...那你怎麼不問問學長？
12/23 09:54, 12F
推
12/23 10:34, , 13F
marker突然變好淡? 意思是之前不會?
12/23 10:34, 13F
推
12/23 11:47, , 14F
transfer buffer太舊?
12/23 11:47, 14F
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12/23 14:01, , 15F
marker我試過3ul也是很清楚喔,而且過期的跟新鮮的都一樣
12/23 14:01, 15F
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12/23 14:02, , 16F
還是你PVDF膜泡的甲醇不過純,我有一次就是這樣><
12/23 14:02, 16F
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12/23 22:09, , 17F
我今天用0.6A 35MIN MARKER明顯多了應該是真的電流過強
12/23 22:09, 17F
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12/23 22:09, , 18F
PVDF膜泡甲純的濃度也有差阿??這我就不知道了耶~
12/23 22:09, 18F
推
12/24 21:38, , 19F
600mA真拼耶...你tank不會很熱嗎= =
12/24 21:38, 19F
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11/11 01:12, , 20F
太淡, 可以多Laod https://muxiv.com
11/11 01:12, 20F
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01/03 16:49, 7年前 , 21F
染看看有沒有蛋白質吧, https://muxiv.com
01/03 16:49, 21F
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