Re: [求救] 如何減少western control的量
你可以試試看做一組control是REMOVE PMA以後放了至少半小時的cell lysate
跟沒有放半小時直接收下來的CELL LYSATE
看來不是本身BASAL LEVEL就已經比較高
因為:
1. REMOVE PMA很再加回去的MEDIUM(WITH SERUM)裡,
有很多growth factors(LIGAND)會induce signaling pathway
2. 細胞還滿sensitive的 如果拿的時候太大力動到它也可能會induce pathway
(像erk 其他我不清楚不過我一律小心處理..)
3. 細胞剛剛換到新的medium 就算沒有serum也可能有些物質會induce pathway
ps..以前有個專門做cell signaling的學長會要求我們換了medium 把死的跟飄的
細胞洗掉後 放至少半個小時才能 treat drug
※ 引述《jackness (馬的!!要拼老命了!)》之銘言：
: 小弟最近在做signaling pathway的define
: 我是用THP-1 cell 然後利用PMA使其分化成MACROPHAGE
: 然後加藥看哪條PATHWAY會被TURN ON
: 但是我發現0分鐘的 P-P38 OR P-JNK 都滿高的 (COMPARE TO 加藥的5~60分鐘)
: 不知道該怎麼解決
: 有人有遇過類似的情形嗎
: 我是分化成MACROPHAGE後
: 先用PBS WASH 後在加藥(in medium+serum)
: 因為要洗去PMA
: 但是CONTROL的量卻很多
: 不像一般照理來講應該是沒有的 = =
: 我也用過PBS WASH 後在加藥(in complete mediume)
: 但還是沒辦法降低control 的磷酸量
: 希望聰明的大大可以幫幫忙 >"<
: 謝謝..
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12/18 21:47, , 1F
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